Ce tableau représente la parenté divine de Sainte Anne et de sa fille la Vierge Marie face à la Passion et à la Rédemption figurées par Jésus enjambant l'agneau du Sacrifice. Il a été commenté, entre autres, par Freud et Meyer Schapiro. On ne sait pas exactement à quelle date il a été peint : peut-être a-t-il été commencé quand le maître a renoncé à travailler sur la Joconde, tableau qu'il considérait comme inachevé. Les deux femmes offrent le même sourire léonardesque (quoique moins énigmatique et plus bienheureux), qui peut-être rappelait à Léonard le souvenir de sa mère, la servante Catarina. Selon Freud (Un souvenir de Léonard de Vinci, p140), ce tableau montre les impressions les plus personnelles de la vie de Léonard, qui a eu deux mères, la sienne propre et une belle-mère aimante, Donna Albiera, femme de son père. Ces deux mères semblent se condenser en une seule figure. Le sourire de Sainte-Anne (Catarina) est ambigu : une tendresse sans borne pour l'enfant (le petit Jésus, mais aussi cet enfant génial que fut Léonard), mais aussi l'annonce du malheur et des privations que connût Léonard (du fait de son inhibition, voire de son homosexualité, il s'interdit à jamais la tendresse des lèvres de femme). Il est possible que la forme de la robe de Marie reproduise le vautour-milan du souvenir d'enfance de Léonard de Vinci.